中低壓制備柱的工作原理是其核心所在。它主要依據物質在固定相和流動相之間的分配系數差異來實現分離。當樣品混合物隨著流動相進入制備柱時，不同的組分與固定相之間發生不同程度的相互作用。一些組分對固定相的親和力較強，在柱內停留時間較長；而另一些組分則與流動相的親和力更大，會較快地隨著流動相流出。通過這種差異，各組分在柱內逐漸分層，實現彼此的分離。例如，在凝膠過濾色譜中，利用凝膠的分子篩作用，根據分子大小對物質進行分離。較小的分子可以進入凝膠內部的孔隙，而較大的分子則被排斥在外，從而使得不同大小的分子在柱內以不同的速度移動，達到分離的目的。
從結構上看，中低壓制備柱通常由柱管、固定相、接頭等部分組成。柱管是制備柱的外殼，一般由耐腐蝕、耐壓的材料制成，如玻璃、不銹鋼等，以確保在不同的工作環境和壓力條件下能夠穩定運行。固定相則是實現分離的關鍵物質，它可以是各種類型的材料，如硅膠、聚合物等。固定相的顆粒大小、孔徑分布以及表面性質等因素都會對分離效果產生重要影響。接頭用于連接柱管和其他設備，保證流動相能夠順利地進出制備柱，同時防止泄漏。
中低壓制備柱的校準方法：
1.流動相系統校準
-流速校準：使用精密流速計或電子天平測量實際流速，與設定值對比，誤差應≤±2。
-梯度校準：若涉及梯度洗脫，需驗證不同比例流動相的混合精度，可通過檢測混合后溶液的pH或電導率一致性判斷。
2.檢測器校準
-波長校準(若為紫外檢測器)：用鈥玻璃濾光片校正波長準確性，誤差應<±1 nm。
-靈敏度校準：注入已知濃度的標準品(如萘或苯)，調整檢測器增益使信號強度與濃度呈線性關系。
3.柱效恢復與標準化
-再生處理：長期使用的柱可能因樣品殘留導致性能下降，可用高純度溶劑(如甲醇、丙酮)沖洗。
-標準品校準：定期用同一標準樣品進樣，對比保留時間及峰面積變化，若偏差>5則需重新平衡或更換填料。
